Диагностика малассезиозов у собак и кошек
ART 970782
Авторы:
О.
Н. Николаева, Д.
М. Галимов
О.
Н. Николаева, Д.
М. Галимов Библиографическое описание статьи для цитирования:
Николаева
О.
Н.,
Галимов
Д.
М. Диагностика малассезиозов у собак и кошек // Научно-методический электронный журнал «Концепт». –
2017. – Т. 39. – С.
2276–2280. – URL:
http://e-koncept.ru/2017/970782.htm.
Аннотация. Механизм развития Malassezia-инфекций связан как с экзогенными и эндогенными факторами, так и со способностью переходить из комменсальных связей микроскопических грибов в патогенное состояние. Это связано с особенностью строения стенки грибов, способностью синтезировать гидролитические ферменты, адгезировать на клетках кожи, взаимодействием с другими патогенными микроорганизмами и внутрипопуляционной коммуникацией. Для диагностики малассезиозных инфекций разработаны объективные алгоритмы диагностики. Однако механизмы патогенеза продолжают исследоваться, и методы диагностики малассезиозных инфекций с каждым годом совершенствуются.
Похожие статьи
Текст статьи
Галимов Данил Маратович,студент4курса факультета биотехнологий и ветеринарной медицины, Башкирский государственный аграрный университет, г. Уфаoksananik83@mail.ru
Николаева Оксана Николаевна,кандидат биологических наук, доцент, Башкирский государственный аграрный университет,г. Уфаoksanachistjakova@rambler.ru
Диагностика малассезиозов у собак и кошек
Аннотация.Работа посвящена изучению современных методов диагностики малассезиозову собак и кошек. Показано, что ветеринарная микологияиспользует объективные методы исследований. Методы диагностики и лечения малассезиозных инфекцийсовершенствуются с каждым годом. Ключевые слова.малассезии, собаки, кошки, диагностика, дерматофитозы.
В течение последних 15 лет род Malasseziaбыл темой интенсивных исследований по систематике, физиологии, биохимии, экологии, иммунологии. Главное место в структуре заболеваемости микозами занимают поражения кожи и ее придатков, основным возбудителем которых считают дрожжеподобные липофильные грибы рода Malassеzia, объединенные в собирательное понятие «малассезиозы кожи»). Malassеzia(старое название Pityrosporum) является одним из пятнадцати родов дрожжеподобных грибов семейства Cryptococcaceae, входящего в группу несовершенных дрожжей. Malassеziaобъединяет девять видов: M. furfur, M. pachidermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. sloofiae M. dermatisи M. еqui.Все виды рода Malasseziaвыделены от животных и человека, являются представителем нормальной микрофлоры кожи человека и теплокровных животных. ВидM. pachydermatisв ветеринарии имеет основное значение, однако имеются случаи, когда M. furfur, M. obtusaопределялись как патогенные при отитах у собак. В этой статье мы рассмотрим морфологию, физиологию, экологию, патогенетическое значение грибов рода Malasseziaи диагностические методы в заболеваниях кожи собак и кошек.Malasseziaвпервые идентифицирована французским учёным LouisCharles Malassezв конце ХIХ в. (1874).Р. Сабуро выявил что вызывает перхоть у человека в начале ХХ века и дал название Pityrosporummalassez. Позже было доказано, что Malasseziaи Pityrosporumи есть один вид, то оставили название «Malassezia».R. Dufaut (1983) установил этиологическую значимость этих грибов при дерматитах собак, в том числе генерализованного характера. С середины 80х годов вопросMalasseziaассоциированных заболеваний животных попал в фокус внимания, как врачейпрактиков, так и исследователей, стал целенаправленно изучаться и активно обсуждаться в научной литературе.Систематическое положение представлено в таком виде:• Надцарство–Eukaryota• Царство –Fungi• Отдел–Basidiomycota• Подотдел –Ustilaginomycotina• Класс –Exobasidiomycetes• Порядок –Malassezailes• Род –Malassezia• Вид –Malassezia species(14 аноморфныхвидов).Грибы рода Malasseziaимеют определенные морфологобиологические и физиологические особенности. M. pachydermatisимеют клетки овальной, эллиптической, реже округлой формы, размер клеток 36,5х2,5 мкм. Для других видов характерна округлая, лимоновидная форма клеток.В дрожжевой стадии тип почкования монополярный, перкуррентный –отделившаяся почка оставляет на материнской клетке шрам в виде воротничка, из которого появляются последующие почки. В силу особенностей почкования клетки приобретают характерную грушевидную форму или форму «отпечатка стопы» или «земляного ореха». По Грамму окрашиваются положительно. Грибы рода Malasseziaпроявляют диморфизм, они могут существовать как в дрожжевой, так и в мицелиальной форме. Ранее было предположение, что дрожжевая форма является отдельным родом в последующем названная Pityrosporum, а мицелиальная Malassezia. В питательной среде, как правило, преобладает дрожжевая форма. Клеточная стенка грибов Malasseziaочень толстая по разным источникам авторы говорят о толщине в 0,12 мкм до 0,25мкм, многослойная, с внешним ламеллярным слоем, который позволяет адгезировать на клетках кожи[1,2]. Клеточная стенка содержит монопротеиды, белки, липиды и хитин, с небольшим содержанием азота и серы. Вид M. pachydermatisявляется единственным липидонезависимым из этого рода, но,не смотря на это,его рост усиливается в присутствии липидов, в то время как все другие виды этого рода являются липидозависимыми, и не способными заново синтезировать C12С24жирные кислоты, однако другой автор говорит только о жирных кислотах с длиной цепи С14и С16[3,4]. Wilde и Stewartобнаружили, что липиды, находящиеся на нормальной коже человека, отвечают требованию липидов, необходимых для роста Malassezia. Поэтому длякультивирования необходимы липидосодержащие среды, многие годы исследователи не могли культивировать малассезии invitro. Впервые сообщившей о необходимости внесения в питательную среду липидной добавки для роста этих грибов была Р. Бенгем.Грибы рода Malasseziaсинтезируют липолитические ферменты, такие как фосфолипазы, которые в свою очередь играют важную роль в патогенности Malassezia spp.Так же они обладают липолитической активностью как invitro так и invivo. Кроме этого малассезии синтезируют протеиназу, гиалуронидазу, сульфатазу [5]. Экспериментально продемонстрирована способность Malassezia spp.проникать в роговой слой, осуществляя его деструкцию, что говорит о способности к инфекционной инвазии. Однако проникновение дрожжевых клеток, по данным авторов, ограничивается лишь верхними слоями эпидермиса [6].Грибы родаMalasseziaвызывают различные иммунные реакции в макроорганизме, причем иммуногенные свойства во многом обусловлены липидным слоем этих грибов. Они взаимодействуют с различными иммунокомпетентными клетками, включая антигенпрезентующие дендритные клетки, макрофаги, эозинофилы, нейтрофилы, стимулируя синтез цитокинов и хемокинов различных функциональных групп. Установлено, что малассезии способны как стимулировать, так и ингибировать синтез провоспалительных цитокинов (IL1, IL6). Вследствие этого воспалительная реакция при малассезиозах может варьировать от практически незаметной, до ярко выраженной [7].Весьма важным является тот факт, что грибы рода Malasseziaустойчивы к механизмам фагоцитоза и способны ингибировать образование провоспалительных цитокинов. Липиды клеточной стенки грибов Malasseziaspp.обеспечивают их защиту от фагоцитоза, а также подавляют воспалительные процессы.Большинство исследователей в последнее время разделяют мнение о том, что грибы рода Malasseziaспособны проявлять патогенные свойства только на фоне определенных предраспологающих факторов. В основном патологический процесс развивается при многократном увеличении числа и плотности популяций в пораженном очаге. Так же важную роль играет способность грибов образовывать биопленки, обеспечивающие защитные и трофические функции. Образование биопленок тесно связанно с внутрипопуляционным общением малассезий, которые синтезируют сигнальные молекулы, передающиеинформацию внутри популяции.Установлено,что малассезиозы у собак и кошек в ассоциации с бактериями встречаются в 25% случаев, а с другими грибами в 2,8% случаев [9]. Например, стафилококки продуцируют липазу, что нарушает секреторную функцию кожных желез и создает благоприятные условия для роста обоих микроорганизмов, в то время как для других микроорганизмов эти условия неблагоприятны. Грибы рода Malasseziaможно обнаружить на коже у большинства теплокровных животных, являясь нормобиотом, но в то же время они вызывают у них различные заболевания. В основном эти грибы концентрируются вокруг сальных желез, используя секрет для роста, поэтому их много в слуховом канале, возле ушей, в области половых органов, головы, межпальцевых складках и слизистых оболочек. Соответственно меньшее их количество будет на без железистых участках кожи. При симбиотическом характере жизни малассезии потребляют жироподобные вещества, взамен синтезирую антибактериальные и антифунгальные вещества. Имеются данные о породной предрасположенности колонизации малассезий у бассетхаундов, такс, коккерспаниелей, терьеров, миниатюрных пуделей. Отечественные исследователи отмечают высокую встречаемость у французских и английских бульдогов, шарпеев, чаучау, мопсов. Объясняяэто тем, что укороченная морда этих пород коррелирует с предрасположенностью кмалассезиозной инфекции [9]. Из кошек больше всего предрасположены девон рекс [8].В большинстве своем малассезиозы возникают как вторичная инфекция, при таких нарушениях как:1.Атопический дерматит (при этом у собак развивается IgE–опосредованная гиперчувствительность к Malassezia);2.Эндокринные нарушения (гипотиреоз, гиперадренокортицизм, сахарный диабет);3.Нарушения кератинизации (себорея, эпидермальная дисплазия);4.Реакции гиперчувствительности;5.Эктопаразиты;6.Длительное лечение антибиотиками или стероидами;7.Анатомические особенности (кожные складки) ;У кошек к развитию малассезиозов дополнительно предраспологают ретровирусные инфекции, неоплазии (паранеоплазии, тимома ассоциированный дерматит), идиопатический фасциальный дерматит, паронихии. Немаловажную роль в развитии малассезиозных инфекций играет роль климатических условий. Чаще всего заболевания регистрируются в периоды повышенной влажности воздуха и повышенной температуры. По данным M. Saridomichelakisetal. низкая распространенность этих заболеваний среди собак в Греции обусловлена сухим климатом этой страны. С другой стороны, в Венесуэле, стране с тропическим климатом, распространенность Malassezia–отитов среди собак составила 69,8% [10].В связи с этим, целью исследованияявилось сравнительное изучение и определение диагностической ценности методов диагностики малассезиозных инфекций в ветеринарной практике мелких домашних животных.Для диагностики используются: анамнез общий и дерматологический, осмотр пациента, цитологическое исследование, посев на культуральные среды.При сборе анамнезадля начала собирают анамнез жизни, который в себя включает:
паспортные данные (кличка, возраст, пол, порода, масса вакцинация). Например,Муха –3 летний не кастрированный кобель породы французский бульдог, вакцинированный 7 июня 2016 года, масса –13,300.
возраст на момент приобретения и происхождение ( от заводчика, в зоомагазине и т.д); где живет; есть ли дома еще животные, диета (в настоящее время и предыдущая); размножение; анамнез болезней и/или хирургических вмешательств; изменение поведения; общее состояние; аппетит; жажда; стул или рвота; мочеиспускание; дыхательная система; аллергические реакции на медикаменты; путешествия.Затем приступает к сбору дерматологического анамнеза:
момент обнаружения первых признаков; с какого участка тела проблема началась; как выглядело первое поражение; имеются ли сезонные усиления;
чешется ли животное: зуд и/или вылизывание в области лап; зуд в области головы, шеи; зуд периорбитальной области; зуд в области анального отверстия; отит зуд ушной раковины; выделения из носа и/или чихание.
чем и как часто обрабатывается от паразитов; как часто купается, моется животное; какие анализы делали; какое лечение проводили, чем и как долго; получает ли сейчас животное какиелибо лекарства; запах (от кожи, из ушей); где животное обычно спит; есть ли поражения у других животных или людей.Клинический осмотрпроводится «с ног до головы». Осмотр начинают с кончика носа до кончика хвоста, при этом захватывая слизистые и кожнослизистые зоны, лимфатические узлы, труднодоступные места (слуховой ход, область ануса, между пальчиков). По клиническим признакам малассезиозных инфекций обращают внимание на наличие зуда; характерный неприятный запах (похожий на смесь гнильцы и кислоты); окрашивание шерсти и когтя в коричневый цвет; поражения могут быть как локализованными, так и генерализованными. Первичные поражения проявляются: эритемами, аллопециями, повышенным выделением сальных желез, чешуйки. Вторичные поражения: экскориациями, гиперпигментациями, лихинефикациями.Наиболее часто у собак и кошек поражаются область головы, вентральная часть тела и область лап.В области головы мычаще увидим поражения в области губ, у кошек чаще увидим в области подбородка; в периокулярной области, складке носа, на вентральной части шеи, в слуховом проходе и на ушных раковинах(рисунок 1).
Рис. 1. Окрашенная шерсть в коричневый цвет при малассезиозной инфекции в области губ и поражение на спинке носа у курильского бобтейла
На вентральной части тела поражения, как правило, наблюдаются в области подмышечной впадины, области живота, области паха, перианальная область.В области лап –это будет межпальцевое пространство, когтевое ложе и сам коготь(рисунок 2).
Рис. 2. Малассезиозная инфекция в межпальцевом пространствеОсновным же диагностическим методом является цитологическое исследование, позволяющее выявить наличие грибов рода Malasseziaи других инфекционных агентов. Обычно данное исследование включает в себя фиксацию препарата, окрашивание для обнаружения Malasseziaи микроскопию в иммерсионной системе микроскопа. Для цитологии берут мазокотпечаток, скотчтест, либо с помощью ватной палочки берут мазок из слухового канала. Для окрашивания мазков нами была использована окраска DiffQuick, являющаяся модификацией метода окрашивания РомановскогоРайта, и выпускаемой промышленным способом. При этом способе клетки гриба окрашиваются в синефиолетовый, реже в краснорозовый цвет. Микроскопию проводят при увеличении х1000 в иммерсионной системе. Обычно при проведении микроскопии мы находили значительное количество малассезий в мазке и назначали лечение, но также при повторной цитологии часто сталкивались с обнаружением единичных клеток грибов рода Malassezia, и расценивали это достаточным для продолжения лечения, либо как настораживающий признак.В Американском колледже ветеринарной дерматологиидаюттакиерекомендацииприоценкемикроскопии: «когда вы оцениваете мазок, если вы находите любую малассезию вообще, то этого становится достаточным для назначения лечения, даже если вы нашли всего лишь 1 или 2 малассезии в 10 или 20 иммерсионных полях зрения».
Рис.3.Микроскопия грибов рода Malassezia,мазок сделан из слухового канала йоркширского терьера.
Микробиологическая диагностика.Для выделения грибов рода Malassezia, используют специальные среды разработанные Leemingи Notman. Эта среда содержит сухую желчь, глицерин, моностеарат глицерина, Твин60 и цельное молоко коровы. Рост колоний занимает от 2х до 4х суток при температуре 3437°C. В качестве источника длинноцепочечных жирных кислот используется оливковое масло. Оптимальный уровень pHдля роста составляет от 5,5 до 6,5. Колонии кремовые, гладкие, мягкие, округлые, сливающиеся. Состоят из почкующихся клеток диаметром от 25 до 36 мкм. Истинный мицелий отсутствует. В практике посев на культуральные среды не несет диагностического значения, так как они могут высеваться и у здоровых животных, а для оценки плотности популяции лучше подходит цитологический метод, также это связано с труднодоступностью данного метода диагностики и экономически не целесообразно для пациентов.
Таким образом,механизм развития Malasseziaинфекцийсвязан как с экзогенными и эндогенными факторами, так и со способностью микроскопических грибов переходить из комменсальных связей в патогенное состояние. Это связано с особенностью строения стенки грибов, способностью синтезировать гидролитические ферменты, адгезировать на клетках кожи, взаимодействием с другими патогенными микроорганизмами и внутрипопуляционной коммуникацией. Для диагностики малассезиозных инфекций разработаны объективные алгоритмы диагностики. Однако механизмы патогенеза продолжают исследовать и методы диагностики малассезиозных инфекций с каждым годом совершенствуются.
Ссылки на источники1.Ершов П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malasseziaпри кожных заболеваниях животных // Дисс. канд. ветеринар. наук. Москва, 2008. 2.Baroni A., Perfetto B., Paoletti I., Ruocco E., Canozo N., Orlando M., Buommino E. Malassezia furfur invasiveness in a keratinocyte cell line (HaCat): effects on cytoskeleton and on adhesion molecule and cytokine expression // Arch Dermatol Res. 293 (8), 2001 Р.3.Benham R.W. The cultural characteristics of Pityrosporumovale –a lipophilic fungus // J. Invest. Dermatol. –1939. –№2. –Р. 187203.4.Bhattacharyya T., Edward M., Cordery C. Colonization of living skin equivalents by Malassezia furfur // Medical Mycology. –36, 1998. P. 1519.5.Bond R., Anthony R., Dodd M. Isolation of Malasseziasympodialis from feline skin // J. med. Vet. Mycol. 34 (2), 1996. P. 145147.6.Coutinho S., Paula C. Proteinase, phospholipase, hyaluronidase and chondroitinsulphatase production by Malasseziapachydermatis // Med. Mycol. 38(1), 2000. Р. 7376.7.David M., Gabriel M., Kopecka M. Unusual ultrastructural characteristics of the yeast Malasseziapachydermatis // Scriptamedica (Brno). 76 (3), 2003. Р. 173186.8.Fernandez G., Barboza G., Villalobos A. Isolation and identification of microorganisms present in 53 dogs suffering otitis externa // RevistaCientifica. 16 (1), 2006. –Р2330.9.Marcon M., Powell D. Human infections due to Malassezia // Clin. Microbiol. Rev. 5(2), 1992. Р. 101119.10.RuthAshbeeH., GlynE., EvansV. ImmunologyofDiseasesAssociatedwithMalassezia Species // J.ClinicalMicrobiology Reviews –2002. –Vol. 15. No. 1 –P. 21 –57.
Николаева Оксана Николаевна,кандидат биологических наук, доцент, Башкирский государственный аграрный университет,г. Уфаoksanachistjakova@rambler.ru
Диагностика малассезиозов у собак и кошек
Аннотация.Работа посвящена изучению современных методов диагностики малассезиозову собак и кошек. Показано, что ветеринарная микологияиспользует объективные методы исследований. Методы диагностики и лечения малассезиозных инфекцийсовершенствуются с каждым годом. Ключевые слова.малассезии, собаки, кошки, диагностика, дерматофитозы.
В течение последних 15 лет род Malasseziaбыл темой интенсивных исследований по систематике, физиологии, биохимии, экологии, иммунологии. Главное место в структуре заболеваемости микозами занимают поражения кожи и ее придатков, основным возбудителем которых считают дрожжеподобные липофильные грибы рода Malassеzia, объединенные в собирательное понятие «малассезиозы кожи»). Malassеzia(старое название Pityrosporum) является одним из пятнадцати родов дрожжеподобных грибов семейства Cryptococcaceae, входящего в группу несовершенных дрожжей. Malassеziaобъединяет девять видов: M. furfur, M. pachidermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta, M. sloofiae M. dermatisи M. еqui.Все виды рода Malasseziaвыделены от животных и человека, являются представителем нормальной микрофлоры кожи человека и теплокровных животных. ВидM. pachydermatisв ветеринарии имеет основное значение, однако имеются случаи, когда M. furfur, M. obtusaопределялись как патогенные при отитах у собак. В этой статье мы рассмотрим морфологию, физиологию, экологию, патогенетическое значение грибов рода Malasseziaи диагностические методы в заболеваниях кожи собак и кошек.Malasseziaвпервые идентифицирована французским учёным LouisCharles Malassezв конце ХIХ в. (1874).Р. Сабуро выявил что вызывает перхоть у человека в начале ХХ века и дал название Pityrosporummalassez. Позже было доказано, что Malasseziaи Pityrosporumи есть один вид, то оставили название «Malassezia».R. Dufaut (1983) установил этиологическую значимость этих грибов при дерматитах собак, в том числе генерализованного характера. С середины 80х годов вопросMalasseziaассоциированных заболеваний животных попал в фокус внимания, как врачейпрактиков, так и исследователей, стал целенаправленно изучаться и активно обсуждаться в научной литературе.Систематическое положение представлено в таком виде:• Надцарство–Eukaryota• Царство –Fungi• Отдел–Basidiomycota• Подотдел –Ustilaginomycotina• Класс –Exobasidiomycetes• Порядок –Malassezailes• Род –Malassezia• Вид –Malassezia species(14 аноморфныхвидов).Грибы рода Malasseziaимеют определенные морфологобиологические и физиологические особенности. M. pachydermatisимеют клетки овальной, эллиптической, реже округлой формы, размер клеток 36,5х2,5 мкм. Для других видов характерна округлая, лимоновидная форма клеток.В дрожжевой стадии тип почкования монополярный, перкуррентный –отделившаяся почка оставляет на материнской клетке шрам в виде воротничка, из которого появляются последующие почки. В силу особенностей почкования клетки приобретают характерную грушевидную форму или форму «отпечатка стопы» или «земляного ореха». По Грамму окрашиваются положительно. Грибы рода Malasseziaпроявляют диморфизм, они могут существовать как в дрожжевой, так и в мицелиальной форме. Ранее было предположение, что дрожжевая форма является отдельным родом в последующем названная Pityrosporum, а мицелиальная Malassezia. В питательной среде, как правило, преобладает дрожжевая форма. Клеточная стенка грибов Malasseziaочень толстая по разным источникам авторы говорят о толщине в 0,12 мкм до 0,25мкм, многослойная, с внешним ламеллярным слоем, который позволяет адгезировать на клетках кожи[1,2]. Клеточная стенка содержит монопротеиды, белки, липиды и хитин, с небольшим содержанием азота и серы. Вид M. pachydermatisявляется единственным липидонезависимым из этого рода, но,не смотря на это,его рост усиливается в присутствии липидов, в то время как все другие виды этого рода являются липидозависимыми, и не способными заново синтезировать C12С24жирные кислоты, однако другой автор говорит только о жирных кислотах с длиной цепи С14и С16[3,4]. Wilde и Stewartобнаружили, что липиды, находящиеся на нормальной коже человека, отвечают требованию липидов, необходимых для роста Malassezia. Поэтому длякультивирования необходимы липидосодержащие среды, многие годы исследователи не могли культивировать малассезии invitro. Впервые сообщившей о необходимости внесения в питательную среду липидной добавки для роста этих грибов была Р. Бенгем.Грибы рода Malasseziaсинтезируют липолитические ферменты, такие как фосфолипазы, которые в свою очередь играют важную роль в патогенности Malassezia spp.Так же они обладают липолитической активностью как invitro так и invivo. Кроме этого малассезии синтезируют протеиназу, гиалуронидазу, сульфатазу [5]. Экспериментально продемонстрирована способность Malassezia spp.проникать в роговой слой, осуществляя его деструкцию, что говорит о способности к инфекционной инвазии. Однако проникновение дрожжевых клеток, по данным авторов, ограничивается лишь верхними слоями эпидермиса [6].Грибы родаMalasseziaвызывают различные иммунные реакции в макроорганизме, причем иммуногенные свойства во многом обусловлены липидным слоем этих грибов. Они взаимодействуют с различными иммунокомпетентными клетками, включая антигенпрезентующие дендритные клетки, макрофаги, эозинофилы, нейтрофилы, стимулируя синтез цитокинов и хемокинов различных функциональных групп. Установлено, что малассезии способны как стимулировать, так и ингибировать синтез провоспалительных цитокинов (IL1, IL6). Вследствие этого воспалительная реакция при малассезиозах может варьировать от практически незаметной, до ярко выраженной [7].Весьма важным является тот факт, что грибы рода Malasseziaустойчивы к механизмам фагоцитоза и способны ингибировать образование провоспалительных цитокинов. Липиды клеточной стенки грибов Malasseziaspp.обеспечивают их защиту от фагоцитоза, а также подавляют воспалительные процессы.Большинство исследователей в последнее время разделяют мнение о том, что грибы рода Malasseziaспособны проявлять патогенные свойства только на фоне определенных предраспологающих факторов. В основном патологический процесс развивается при многократном увеличении числа и плотности популяций в пораженном очаге. Так же важную роль играет способность грибов образовывать биопленки, обеспечивающие защитные и трофические функции. Образование биопленок тесно связанно с внутрипопуляционным общением малассезий, которые синтезируют сигнальные молекулы, передающиеинформацию внутри популяции.Установлено,что малассезиозы у собак и кошек в ассоциации с бактериями встречаются в 25% случаев, а с другими грибами в 2,8% случаев [9]. Например, стафилококки продуцируют липазу, что нарушает секреторную функцию кожных желез и создает благоприятные условия для роста обоих микроорганизмов, в то время как для других микроорганизмов эти условия неблагоприятны. Грибы рода Malasseziaможно обнаружить на коже у большинства теплокровных животных, являясь нормобиотом, но в то же время они вызывают у них различные заболевания. В основном эти грибы концентрируются вокруг сальных желез, используя секрет для роста, поэтому их много в слуховом канале, возле ушей, в области половых органов, головы, межпальцевых складках и слизистых оболочек. Соответственно меньшее их количество будет на без железистых участках кожи. При симбиотическом характере жизни малассезии потребляют жироподобные вещества, взамен синтезирую антибактериальные и антифунгальные вещества. Имеются данные о породной предрасположенности колонизации малассезий у бассетхаундов, такс, коккерспаниелей, терьеров, миниатюрных пуделей. Отечественные исследователи отмечают высокую встречаемость у французских и английских бульдогов, шарпеев, чаучау, мопсов. Объясняяэто тем, что укороченная морда этих пород коррелирует с предрасположенностью кмалассезиозной инфекции [9]. Из кошек больше всего предрасположены девон рекс [8].В большинстве своем малассезиозы возникают как вторичная инфекция, при таких нарушениях как:1.Атопический дерматит (при этом у собак развивается IgE–опосредованная гиперчувствительность к Malassezia);2.Эндокринные нарушения (гипотиреоз, гиперадренокортицизм, сахарный диабет);3.Нарушения кератинизации (себорея, эпидермальная дисплазия);4.Реакции гиперчувствительности;5.Эктопаразиты;6.Длительное лечение антибиотиками или стероидами;7.Анатомические особенности (кожные складки) ;У кошек к развитию малассезиозов дополнительно предраспологают ретровирусные инфекции, неоплазии (паранеоплазии, тимома ассоциированный дерматит), идиопатический фасциальный дерматит, паронихии. Немаловажную роль в развитии малассезиозных инфекций играет роль климатических условий. Чаще всего заболевания регистрируются в периоды повышенной влажности воздуха и повышенной температуры. По данным M. Saridomichelakisetal. низкая распространенность этих заболеваний среди собак в Греции обусловлена сухим климатом этой страны. С другой стороны, в Венесуэле, стране с тропическим климатом, распространенность Malassezia–отитов среди собак составила 69,8% [10].В связи с этим, целью исследованияявилось сравнительное изучение и определение диагностической ценности методов диагностики малассезиозных инфекций в ветеринарной практике мелких домашних животных.Для диагностики используются: анамнез общий и дерматологический, осмотр пациента, цитологическое исследование, посев на культуральные среды.При сборе анамнезадля начала собирают анамнез жизни, который в себя включает:
паспортные данные (кличка, возраст, пол, порода, масса вакцинация). Например,Муха –3 летний не кастрированный кобель породы французский бульдог, вакцинированный 7 июня 2016 года, масса –13,300.
возраст на момент приобретения и происхождение ( от заводчика, в зоомагазине и т.д); где живет; есть ли дома еще животные, диета (в настоящее время и предыдущая); размножение; анамнез болезней и/или хирургических вмешательств; изменение поведения; общее состояние; аппетит; жажда; стул или рвота; мочеиспускание; дыхательная система; аллергические реакции на медикаменты; путешествия.Затем приступает к сбору дерматологического анамнеза:
момент обнаружения первых признаков; с какого участка тела проблема началась; как выглядело первое поражение; имеются ли сезонные усиления;
чешется ли животное: зуд и/или вылизывание в области лап; зуд в области головы, шеи; зуд периорбитальной области; зуд в области анального отверстия; отит зуд ушной раковины; выделения из носа и/или чихание.
чем и как часто обрабатывается от паразитов; как часто купается, моется животное; какие анализы делали; какое лечение проводили, чем и как долго; получает ли сейчас животное какиелибо лекарства; запах (от кожи, из ушей); где животное обычно спит; есть ли поражения у других животных или людей.Клинический осмотрпроводится «с ног до головы». Осмотр начинают с кончика носа до кончика хвоста, при этом захватывая слизистые и кожнослизистые зоны, лимфатические узлы, труднодоступные места (слуховой ход, область ануса, между пальчиков). По клиническим признакам малассезиозных инфекций обращают внимание на наличие зуда; характерный неприятный запах (похожий на смесь гнильцы и кислоты); окрашивание шерсти и когтя в коричневый цвет; поражения могут быть как локализованными, так и генерализованными. Первичные поражения проявляются: эритемами, аллопециями, повышенным выделением сальных желез, чешуйки. Вторичные поражения: экскориациями, гиперпигментациями, лихинефикациями.Наиболее часто у собак и кошек поражаются область головы, вентральная часть тела и область лап.В области головы мычаще увидим поражения в области губ, у кошек чаще увидим в области подбородка; в периокулярной области, складке носа, на вентральной части шеи, в слуховом проходе и на ушных раковинах(рисунок 1).
Рис. 1. Окрашенная шерсть в коричневый цвет при малассезиозной инфекции в области губ и поражение на спинке носа у курильского бобтейла
На вентральной части тела поражения, как правило, наблюдаются в области подмышечной впадины, области живота, области паха, перианальная область.В области лап –это будет межпальцевое пространство, когтевое ложе и сам коготь(рисунок 2).
Рис. 2. Малассезиозная инфекция в межпальцевом пространствеОсновным же диагностическим методом является цитологическое исследование, позволяющее выявить наличие грибов рода Malasseziaи других инфекционных агентов. Обычно данное исследование включает в себя фиксацию препарата, окрашивание для обнаружения Malasseziaи микроскопию в иммерсионной системе микроскопа. Для цитологии берут мазокотпечаток, скотчтест, либо с помощью ватной палочки берут мазок из слухового канала. Для окрашивания мазков нами была использована окраска DiffQuick, являющаяся модификацией метода окрашивания РомановскогоРайта, и выпускаемой промышленным способом. При этом способе клетки гриба окрашиваются в синефиолетовый, реже в краснорозовый цвет. Микроскопию проводят при увеличении х1000 в иммерсионной системе. Обычно при проведении микроскопии мы находили значительное количество малассезий в мазке и назначали лечение, но также при повторной цитологии часто сталкивались с обнаружением единичных клеток грибов рода Malassezia, и расценивали это достаточным для продолжения лечения, либо как настораживающий признак.В Американском колледже ветеринарной дерматологиидаюттакиерекомендацииприоценкемикроскопии: «когда вы оцениваете мазок, если вы находите любую малассезию вообще, то этого становится достаточным для назначения лечения, даже если вы нашли всего лишь 1 или 2 малассезии в 10 или 20 иммерсионных полях зрения».
Рис.3.Микроскопия грибов рода Malassezia,мазок сделан из слухового канала йоркширского терьера.
Микробиологическая диагностика.Для выделения грибов рода Malassezia, используют специальные среды разработанные Leemingи Notman. Эта среда содержит сухую желчь, глицерин, моностеарат глицерина, Твин60 и цельное молоко коровы. Рост колоний занимает от 2х до 4х суток при температуре 3437°C. В качестве источника длинноцепочечных жирных кислот используется оливковое масло. Оптимальный уровень pHдля роста составляет от 5,5 до 6,5. Колонии кремовые, гладкие, мягкие, округлые, сливающиеся. Состоят из почкующихся клеток диаметром от 25 до 36 мкм. Истинный мицелий отсутствует. В практике посев на культуральные среды не несет диагностического значения, так как они могут высеваться и у здоровых животных, а для оценки плотности популяции лучше подходит цитологический метод, также это связано с труднодоступностью данного метода диагностики и экономически не целесообразно для пациентов.
Таким образом,механизм развития Malasseziaинфекцийсвязан как с экзогенными и эндогенными факторами, так и со способностью микроскопических грибов переходить из комменсальных связей в патогенное состояние. Это связано с особенностью строения стенки грибов, способностью синтезировать гидролитические ферменты, адгезировать на клетках кожи, взаимодействием с другими патогенными микроорганизмами и внутрипопуляционной коммуникацией. Для диагностики малассезиозных инфекций разработаны объективные алгоритмы диагностики. Однако механизмы патогенеза продолжают исследовать и методы диагностики малассезиозных инфекций с каждым годом совершенствуются.
Ссылки на источники1.Ершов П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malasseziaпри кожных заболеваниях животных // Дисс. канд. ветеринар. наук. Москва, 2008. 2.Baroni A., Perfetto B., Paoletti I., Ruocco E., Canozo N., Orlando M., Buommino E. Malassezia furfur invasiveness in a keratinocyte cell line (HaCat): effects on cytoskeleton and on adhesion molecule and cytokine expression // Arch Dermatol Res. 293 (8), 2001 Р.3.Benham R.W. The cultural characteristics of Pityrosporumovale –a lipophilic fungus // J. Invest. Dermatol. –1939. –№2. –Р. 187203.4.Bhattacharyya T., Edward M., Cordery C. Colonization of living skin equivalents by Malassezia furfur // Medical Mycology. –36, 1998. P. 1519.5.Bond R., Anthony R., Dodd M. Isolation of Malasseziasympodialis from feline skin // J. med. Vet. Mycol. 34 (2), 1996. P. 145147.6.Coutinho S., Paula C. Proteinase, phospholipase, hyaluronidase and chondroitinsulphatase production by Malasseziapachydermatis // Med. Mycol. 38(1), 2000. Р. 7376.7.David M., Gabriel M., Kopecka M. Unusual ultrastructural characteristics of the yeast Malasseziapachydermatis // Scriptamedica (Brno). 76 (3), 2003. Р. 173186.8.Fernandez G., Barboza G., Villalobos A. Isolation and identification of microorganisms present in 53 dogs suffering otitis externa // RevistaCientifica. 16 (1), 2006. –Р2330.9.Marcon M., Powell D. Human infections due to Malassezia // Clin. Microbiol. Rev. 5(2), 1992. Р. 101119.10.RuthAshbeeH., GlynE., EvansV. ImmunologyofDiseasesAssociatedwithMalassezia Species // J.ClinicalMicrobiology Reviews –2002. –Vol. 15. No. 1 –P. 21 –57.
